在分子生物學(xué)研究領(lǐng)域，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒作為將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA 的關(guān)鍵工具，其性能優(yōu)劣直接影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與可靠性。市場(chǎng)上琳瑯滿目的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒各具特色，本文將對(duì)幾款常用的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行深入對(duì)比，為科研人員在選擇時(shí)提供參考。
該試劑盒核心成分為經(jīng)克隆技術(shù)制備的禽成髓細(xì)胞瘤病毒（AMV）逆轉(zhuǎn)錄酶，通過(guò)基因工程手段在大腸桿菌中高效表達(dá)，穩(wěn)定性與純度更高。逆轉(zhuǎn)錄時(shí)，AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶以 RNA 為模板，利用 dNTPs 從引物 3’端合成互補(bǔ) DNA 鏈。若用隨機(jī)引物，可隨機(jī)結(jié)合 RNA 鏈啟動(dòng)反應(yīng)，適用于未知序列 RNA；寡聚 dT 引物則特異性結(jié)合 mRNA 的 poly (A) 尾，用于 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄。過(guò)程中，酶的 RNA 酶 H 活性降解 RNA - DNA 雜合雙鏈中的 RNA 鏈，隨后合成雙鏈 cDNA。此酶在 37 - 55°C 寬溫度范圍保持高活性，能有效應(yīng)對(duì)復(fù)雜 RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)，提升富含 GC 區(qū)域或復(fù)雜結(jié)構(gòu) RNA 樣本的逆轉(zhuǎn)錄效率。
高靈敏度與特異性：能檢測(cè)低至皮克級(jí)別的 RNA，對(duì) RNA 模板特異性強(qiáng)，可精準(zhǔn)合成 cDNA，減少非特異擴(kuò)增，為稀有 mRNA 檢測(cè)提供可靠模板。
長(zhǎng)片段逆轉(zhuǎn)錄能力：可合成長(zhǎng)達(dá) 10kb 的 cDNA，在全長(zhǎng)基因表達(dá)研究、大基因片段克隆等實(shí)驗(yàn)中意義重大，能完整保留基因序列信息。
操作簡(jiǎn)便與重復(fù)性好：操作流程優(yōu)化，按說(shuō)明書混合試劑、加入樣本孵育即可。成分穩(wěn)定及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)工藝保障不同批次間重復(fù)性，適合大量逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)，提高實(shí)驗(yàn)效率。
適用于多種 RNA 樣本，如總 RNA、mRNA、病毒 RNA 等。在基礎(chǔ)科研細(xì)胞基因表達(dá)研究、病毒學(xué)病毒基因組分析、生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)生物制藥基因工程操作等場(chǎng)景中廣泛應(yīng)用。
由 Thermo Fisher Scientific 推出，同樣利用高效逆轉(zhuǎn)錄酶將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。其逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì) RNA 模板親和力高，可在相對(duì)溫和條件下實(shí)現(xiàn)高效逆轉(zhuǎn)錄，合成大量 cDNA 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
高產(chǎn)量合成：能從多種 RNA 樣本高效合成 cDNA，滿足大規(guī)模基因表達(dá)分析、分子克隆等對(duì) cDNA 產(chǎn)量要求高的實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建 cDNA 文庫(kù)時(shí)可提供豐富資源。
穩(wěn)定性好：試劑盒各成分穩(wěn)定，受實(shí)驗(yàn)環(huán)境波動(dòng)影響小，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性與可靠性。
適用于需大量 cDNA 的實(shí)驗(yàn)，如基因芯片分析、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等對(duì)樣本起始量要求高的高通量實(shí)驗(yàn)，能確保有足夠 cDNA 用于后續(xù)復(fù)雜分析。
以的 SuperScript III 逆轉(zhuǎn)錄酶為核心，該酶經(jīng)特殊改造，相比傳統(tǒng)逆轉(zhuǎn)錄酶，熱穩(wěn)定性與活性顯著提升。反應(yīng)時(shí)可在較寬溫度范圍工作，通過(guò)提高反應(yīng)溫度破壞 RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)，確保對(duì)復(fù)雜結(jié)構(gòu) RNA 模板的高效逆轉(zhuǎn)錄。
復(fù)雜結(jié)構(gòu) RNA 處理能力強(qiáng)：對(duì)于富含 GC 區(qū)域、具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的 RNA，能通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)溫度實(shí)現(xiàn)有效逆轉(zhuǎn)錄，提高逆轉(zhuǎn)錄成功率與準(zhǔn)確性。
高保真度：合成的 cDNA 忠實(shí)反映 RNA 模板序列，減少堿基錯(cuò)配，為后續(xù)基因功能研究、突變分析等對(duì)序列準(zhǔn)確性要求高的實(shí)驗(yàn)提供可靠基礎(chǔ)。
常用于研究具有特殊結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)，如某些疾病相關(guān)基因或在特定生理?xiàng)l件下形成復(fù)雜 RNA 結(jié)構(gòu)的基因。在病毒基因組研究中，對(duì)具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的病毒 RNA 也能有效逆轉(zhuǎn)錄。
試劑盒組成全面，含 Revertaid 逆轉(zhuǎn)錄酶、RiboLock RNase 抑制劑、5X 反應(yīng)緩沖液、dNTP mix、oligo (dT) 18 引物、隨機(jī)六聚體引物等。逆轉(zhuǎn)錄酶能高效識(shí)別 RNA 模板，在多種輔助成分協(xié)同下，快速準(zhǔn)確地將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。
全面的試劑配備：多種引物選擇，適用于不同類型 RNA 逆轉(zhuǎn)錄，無(wú)論是 mRNA 還是具有特殊結(jié)構(gòu)的 RNA，都能找到合適引物。
高效性：60 分鐘內(nèi)可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高實(shí)驗(yàn)效率。
良好的兼容性：對(duì) RNA 模板質(zhì)量要求相對(duì)寬泛，可處理部分降解或純度不高的 RNA 樣本，仍能獲得可用的 cDNA 產(chǎn)物。
適合基礎(chǔ)科研中細(xì)胞內(nèi)各類基因表達(dá)初步檢測(cè)，對(duì)樣本質(zhì)量要求不苛刻，能快速獲得 cDNA 用于后續(xù)初步分析，為實(shí)驗(yàn)方向提供參考。
專為逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)設(shè)計(jì)，采用 Multiscribe 逆轉(zhuǎn)錄酶，最佳反應(yīng)溫度 42°C。該酶與 TaqMan 實(shí)時(shí)定量 PCR 技術(shù)配套，能精準(zhǔn)將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，為基于 TaqMan 探針的定量 PCR 提供高質(zhì)量模板。
與 TaqMan 技術(shù)適配：在 TaqMan 實(shí)時(shí)定量 PCR 實(shí)驗(yàn)中，能提供高度匹配的 cDNA 模板，確保定量分析的準(zhǔn)確性與靈敏度，對(duì)基因表達(dá)精準(zhǔn)定量。
特異性強(qiáng)：有效減少非特異性擴(kuò)增，使 PCR 擴(kuò)增結(jié)果更能真實(shí)反映樣本中目標(biāo)基因的表達(dá)水平。
主要用于對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行精準(zhǔn)定量分析，如疾病相關(guān)基因表達(dá)量變化研究、藥物作用機(jī)制中基因表達(dá)調(diào)控研究等，為科研人員提供精確的基因表達(dá)數(shù)據(jù)。
核心成分 Transcriptor 逆轉(zhuǎn)錄酶在大腸桿菌中重組表達(dá)，具有 RNA 指導(dǎo)的 DNA 聚合酶活性、DNA 依賴的 DNA 聚合酶活性、解旋活性及 RNase H 活性。熱穩(wěn)定性高，可在高達(dá) 65°C 溫度下工作，能合成長(zhǎng)達(dá) 14 kb 的 cDNA 產(chǎn)物。試劑盒提供隨機(jī)六聚體引物和錨定 oligo (dT) 18 引物等多種選擇。
強(qiáng)大的長(zhǎng)片段合成能力：可逆轉(zhuǎn)錄超長(zhǎng) RNA 片段，在長(zhǎng)基因研究、復(fù)雜轉(zhuǎn)錄本分析中優(yōu)勢(shì)明顯，能完整保留基因信息。
無(wú)需額外 RNase H 孵育：酶自身具備 RNase H 活性，逆轉(zhuǎn)錄后無(wú)需單獨(dú)孵育步驟，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程，降低成本與實(shí)驗(yàn)誤差。
高適應(yīng)性：多種引物選擇，可根據(jù) RNA 樣本類型靈活調(diào)整，適應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)需求。
適用于長(zhǎng)片段基因研究、轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜結(jié)構(gòu)分析等對(duì) cDNA 長(zhǎng)度和完整性要求高的實(shí)驗(yàn)，在基因結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系研究中發(fā)揮重要作用。
利用 AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶，在 15 分鐘內(nèi)快速將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。試劑盒同時(shí)包含 oligo (dT) 15 和隨機(jī)引物，適用于多種 RNA 來(lái)源。提供 1.2 kb 聚腺苷酸化 RNA 轉(zhuǎn)錄本作為對(duì)照模板，方便優(yōu)化實(shí)驗(yàn)參數(shù)。
快速高效：極短時(shí)間內(nèi)完成逆轉(zhuǎn)錄，滿足對(duì)實(shí)驗(yàn)時(shí)間要求高的場(chǎng)景，如緊急病毒 RNA 檢測(cè)。
操作便捷：引物選擇多樣，對(duì)照模板有助于實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，降低實(shí)驗(yàn)難度，提高實(shí)驗(yàn)成功率。
良好的擴(kuò)增適用性：合成的 cDNA 可直接用于多次 PCR 擴(kuò)增，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供便利。
常用于對(duì)時(shí)間敏感的實(shí)驗(yàn)，如病毒感染快速診斷、應(yīng)急樣本檢測(cè)等，能在短時(shí)間內(nèi)提供可靠的 cDNA 用于后續(xù)分析。
涵蓋第一鏈 cDNA 合成所需所有試劑，逆轉(zhuǎn)錄酶為重組生產(chǎn)的 M - MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶改良版本，消除 RNase H 活性且提高熱穩(wěn)定性，可合成高度結(jié)構(gòu)化長(zhǎng) cDNA 片段，實(shí)現(xiàn)靈敏且特異的 RT - PCR 反應(yīng)。
高特異性與靈敏度：對(duì)目標(biāo) RNA 逆轉(zhuǎn)錄特異性強(qiáng)，能檢測(cè)低豐度 RNA，為微量樣本或稀有轉(zhuǎn)錄本研究提供可能。
穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：優(yōu)質(zhì)試劑與優(yōu)化反應(yīng)體系保證不同批次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的高度重復(fù)性，為長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)研究提供穩(wěn)定數(shù)據(jù)支持。
適用于多種實(shí)驗(yàn)：可用于 DNA 標(biāo)記等對(duì) cDNA 質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)特異性要求嚴(yán)格的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，滿足多樣化科研需求。
適用于對(duì) cDNA 質(zhì)量、特異性和靈敏度要求的實(shí)驗(yàn)，如基因功能驗(yàn)證精確表達(dá)分析、疾病相關(guān)微小 RNA 研究等，為深入探究基因功能提供高質(zhì)量 cDNA 樣本。
| 試劑盒名稱 | 核心酶特點(diǎn) | 靈敏度 | 長(zhǎng)片段合成能力 | 操作便捷性 | 適用場(chǎng)景 |
|---|
| Thermo CLONED AMV FIRST STRA SYN KIT | 克隆 AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶，寬溫活性 | 皮克級(jí) | 10kb | 簡(jiǎn)便 | 多種 RNA 樣本，多領(lǐng)域通用 |
| 高容量 cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 | 高效逆轉(zhuǎn)錄酶，親和力高 | 較高 | 良好 | 較簡(jiǎn)便 | 需大量 cDNA 的高通量實(shí)驗(yàn) |
| SuperScript™ III 第一鏈合成系統(tǒng) | 改良 SuperScript III 逆轉(zhuǎn)錄酶，熱穩(wěn)定性好 | 高 | 較好 | 一般 | 復(fù)雜結(jié)構(gòu) RNA 研究 |
| Revertaid 第一鏈 cDNA 合成試劑盒 | Revertaid 逆轉(zhuǎn)錄酶，多成分協(xié)同 | 較高 | 一般 | 簡(jiǎn)便 | 基礎(chǔ)科研初步基因表達(dá)檢測(cè) |
| TaqMan™逆轉(zhuǎn)錄試劑 | Multiscribe 逆轉(zhuǎn)錄酶，適配 TaqMan 技術(shù) | 高 | 一般 | 較簡(jiǎn)便 | 基因表達(dá)精準(zhǔn)定量分析 |
| Roche 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 | Transcriptor 逆轉(zhuǎn)錄酶，多功能 | 高 | 14kb | 較復(fù)雜 | 長(zhǎng)片段基因與復(fù)雜轉(zhuǎn)錄本研究 |
| 逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)（Promega） | AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶，快速反應(yīng) | 較高 | 一般 | 便捷 | 時(shí)間敏感實(shí)驗(yàn)，如病毒檢測(cè) |
| Scriptum 第一鏈 cDNA 合成試劑盒 | 改良 M - MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶，高特異性 | 高 | 良好 | 較簡(jiǎn)便 | 高要求分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn) |
不同的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒在核心技術(shù)、性能表現(xiàn)及適用場(chǎng)景上各有千秋。科研人員在選擇時(shí)，需綜合考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹颖绢愋汀?duì) cDNA 質(zhì)量與產(chǎn)量要求以及預(yù)算等因素，從而挑選出自身研究需求的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，為分子生物學(xué)研究的順利開(kāi)展奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)
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